Espectro de Fluorocromo

por **ProfAntonio** Qui Jun 20, 2019 1:33 pm

Espectro de Fluorocromo

A Figura 4 ilustra os espectros de excitação e emissão de um único fluorocromo, sobreposto no mesmo gráfico. A porcentagem de transmissão é plotada como uma função do comprimento de onda de excitação e emissão. Abaixo estão descritas várias características gerais dos espectros de fluorescência e como eles se relacionam com a microscopia de fluorescência e o design do filtro.

Figura 3: Espectros genéricos de excitação e emissão para um corante fluorescente.

Primeiro, embora algumas substâncias tenham espectros muito amplos de excitação e emissão, a maioria dos fluorocromos possui bandas de excitação e emissão bem definidas. Os espectros da Figura 4 são um exemplo típico, e a diferença no comprimento de onda entre os picos dessas bandas é referida como o deslocamento de Stokes.

Segundo, embora a intensidade geral de emissão varie com o comprimento de onda de excitação, a distribuição espectral da luz emitida é amplamente independente do comprimento de onda de excitação.

Terceiro, a excitação e emissão de um fluorocromo pode mudar com mudanças no ambiente celular, como nível de pH, concentração de corante e conjugação com outras substâncias. Vários corantes (FURA-2 e Indo-1, por exemplo) são úteis expressamente porque apresentam grandes variações em seus espectros de excitação ou emissão com mudanças na concentração de íons como H + (nível de pH), Ca 2+ e Na +. . Por favor, note que os espectros são medidos em um ambiente padronizado e não celular. Um ambiente celular, pelas razões descritas acima, pode afetar a precisão dos espectros relatados para um determinado fluorocromo.

Por último, existem reações fotoquímicas que causam a eficiência de fluorescência de um corante para diminuir com o tempo, um efeito chamado fotobranqueamento ou desbotamento. Estes espectros são gerados por um instrumento chamado espectrofluorímetro, que é composto por dois espectrômetros: um espectrômetro iluminador e um espectrômetro analisador. Primeiro, a amostra de corante é fortemente iluminada por uma cor de luz que causa alguma fluorescência. Um espectro da emissão fluorescente é obtido por varredura com o espectrômetro analisador usando esta cor de iluminação fixa. O analisador é então fixado na cor de emissão mais brilhante, e um espectro da excitação é obtido por varredura com o espectrômetro de iluminação e medindo a variação na intensidade de emissão neste comprimento de onda fixo. Para o propósito de projetar filtros,

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